Identificazione della Salmonella (in pollo e acqua)

ATTENZIONE: al minuto 6:42 faccio un errore, SI INCUBA A 42°C, non a 44°C.

Di seguito riporto la metodica riassuntiva che seguo:

Materiali, strumenti e sostanze

• beute di diversa capacità
• piastre Petri
• pipette di varie portate
• incubatore
• acqua distillata (sterile e non)
• terreno di pre-arricchimento: acqua peptonata tamponata (BPW)
• terreno di arricchimento selettivo: MSRV + supplemento (novobiocina)

Procedimento

Pre-arricchimento:

• preparare 225 g di acqua peptonata tamponata per ogni campione e sterilizzare in autoclave
• aggiungere 25 g di campione alla beuta di BPW
• omogeneizzare (con Stomacher)
• incubare a 37°C per 24 ore

Isolamento

• preparare il terreno MSRV facendo attenzione a NON autoclavare, ma sterilizzare su piastra riscaldante come da istruzioni
• ricostituire una fiala di supplemento con acqua distillata sterile (1 fiala per 500 ml di terreno, fare le dovute proporzioni se il volume è minore)
• addizionare il supplemento (novobiocina) al terreno, facendo attenzione che questo non superi i 50°C
• distribuire in piastra di Petri e lasciar solidificare (l'MSRV è un terreno semi-solido, quindi non solidifica totalmente)
• depositare 0,1 ml di brodocoltura sulla superficie del terreno in tre punti equidistanti fra loro
• incubare a 42°C per 24 ore SENZA capovolgerle
• osservare lo sviluppo colturale attorno ai punti di inoculo

Principio e osservazioni

L' MSRV permette l'identificazione dei ceppi mobili di Salmonella. Data la sua natura semi-solida, i ceppi mobili possono migrare e formare un alone opaco attorno ai punti di inoculo. 

I risultati permettono di stabilire la presenza o assenza di Salmonella nel campione.

A causa della presenza di verde malachite, magnesio cloruro e del basso valore di pH, la crescita di Salmonella typhi e paratyphi è inibita, così come quella di Escherichia coli e Staphylococcus aureus.